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導(dǎo)讀

    纈氨酸(Val)作為家禽功能性必需支鏈氨基酸之一，是肉雞玉米－豆粕型飼糧的第4限制性氨基酸。有研究表明，Val能夠抑制組織蛋白的降解，改善畜禽胴體品質(zhì)，且能通過(guò)影響免疫器官的發(fā)育及免疫球蛋白的合成來(lái)影響免疫功能;此外，Val在畜禽特殊生理時(shí)期能夠促進(jìn)糖異生作用，從而調(diào)節(jié)哺乳母豬的泌乳性能。有研究表明，肉雞飼喂低蛋白質(zhì)的氨基酸平衡飼糧不僅未影響其生長(zhǎng)性能，還改善了屠宰性能并提高了干物質(zhì)及粗蛋白質(zhì)的代謝率，減少了糞便中干物質(zhì)及氮的排出量。肉雞營(yíng)養(yǎng)研究者配制低蛋白質(zhì)飼糧時(shí)主要考慮補(bǔ)充賴(lài)氨酸(Lys)、蛋氨酸、蘇氨酸和色氨酸，較少關(guān)注Val。隨著低蛋白質(zhì)飼糧配制中Lys、蛋氨酸、蘇氨酸和色氨酸的大量使用，Val將成為肉雞飼糧的主要限制性氨基酸。但迄今為止關(guān)于肉雞低蛋白質(zhì)飼糧Val應(yīng)用研究尚少見(jiàn)報(bào)道。因此，本文研究低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val對(duì)肉雞生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)代謝的影響，為肉雞低蛋白質(zhì)飼糧配方設(shè)計(jì)和應(yīng)用提供參考。

1.1 試驗(yàn)材料

      試驗(yàn)所用Val 來(lái)自于希杰第一制糖( CJ Cheiljedang Corporation) ，含量為98%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼糧

     選取300 只1 日齡健康愛(ài)拔益加( AA) 肉公雞，隨機(jī)分成5 個(gè)組( Ⅰ～Ⅴ組) ，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只雞。試驗(yàn)各組前期( 1 ～ 21 日齡) 和后期( 22 ～ 42 日齡) 飼糧粗蛋白質(zhì)水平分別為19.55% 和17.67%，Lys 水平分別為1.17% 和1.01%。前期和后期各組Val /Lys 值分別設(shè)置為68%、73%、78%、83%和88%，并通過(guò)調(diào)節(jié)基礎(chǔ)飼糧中Val 與載體的添加量達(dá)到預(yù)設(shè)水平，配制前后檢測(cè)飼料原料及各組飼糧氨基酸含量，各組飼糧中Lys 和Val 含量以及Val /Lys 值見(jiàn)表1，試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧參考《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》( NY /T 33—2004) 配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。試驗(yàn)期42 d。

1.3 飼養(yǎng)管理

    試驗(yàn)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院南口中試基地試驗(yàn)雞場(chǎng)進(jìn)行。采用3 層重疊式籠養(yǎng)，自由采食，自由飲水，人工24 h 光照，水循環(huán)式暖氣供熱，前3 d 雞舍溫度維持在33 ℃，此后每周降低2 ℃，直到24 ℃，并維持在24 ℃。試驗(yàn)雞舍良好通風(fēng)。飼養(yǎng)管理參照《AA 肉雞飼養(yǎng)管理規(guī)程》進(jìn)行。1 日齡接種馬立克疫苗，7 日齡滴鼻接種新城疫和腎傳支二聯(lián)苗。

1.4 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.4.1 飼糧原料成分檢測(cè)  

     按照AOAC( 2003) 標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定飼糧原料和飼糧中粗蛋白質(zhì)和氨基酸含量。粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測(cè)定。樣品經(jīng)鹽酸水解用氨基酸自動(dòng)分析儀( L－8800，日本) 測(cè)定15 種氨基酸含量，經(jīng)甲酸氧化用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定含硫氨基酸含量，經(jīng)氫氧化鈉水解用反相液相色譜儀( Waters2690，MA，美國(guó)) 測(cè)定色氨酸含量。

1.4.2 生長(zhǎng)性能

    在肉雞42 日齡時(shí)，以重復(fù)為單位進(jìn)行稱(chēng)重，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期間各重復(fù)耗料量，計(jì)算平均日增重( ADG) 、平均日采食量( ADFI) 和料重比( F /G) 。

1.4.3 屠宰性能

    42 日齡時(shí)，每重復(fù)選取1 只接近平均體重肉雞，記錄活重，頸靜脈放血屠宰，按《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量統(tǒng)計(jì)方法》( NY /T 823—2004) 測(cè)定屠宰率、全凈膛率、腿肌率、胸肌率和腹脂率。

1.4.4 血清生化指標(biāo)和游離氨基酸含量的測(cè)定

     在肉雞42 日齡時(shí)，以重復(fù)為單位挑選與平均體重接近的公雞各1 只，頸靜脈采血10 mL，4 ℃、3 000 r /min 離心15 min 分離血清，用日立7600 全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清總蛋白( TP) 、白蛋白( ALB) 、球蛋白( GLB) 、總膽固醇( TC) 、甘油三酯( TG) 、尿酸( UA) 和葡萄糖( Glu) 含量。血清中總超氧化物歧化酶( T-SOD) 、過(guò)氧化氫酶( CAT) 活性和丙二醛( MDA) 含量均采用試劑盒測(cè)定，試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所，操作步驟按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。血清游離氨基酸含量使用S7130 AminoAcid Ｒeagent Organizer 氨基酸全自動(dòng)分析儀( Sykam 公司，德國(guó)) 測(cè)定，具體操作步驟: 樣品添加200 μL 磺基水楊酸( 10%) 混合均勻提取，然后加入甲醇使蛋白質(zhì)沉淀，于4 ℃ 1 h 后，12 000 r /min離心20 min。適當(dāng)稀釋后，將上清液通過(guò)0.25 μm 孔徑的過(guò)濾膜，然后直接注入分析儀用于游離氨基酸的測(cè)定。使用茚三酮作為三甲基苯的底物，流速為0. 09 mL /min，注射量為50 μL，波長(zhǎng)為570 nm。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0 軟件中的one-way ANOVA 過(guò)程進(jìn)行方差檢驗(yàn)，Duncan 氏法進(jìn)行各組間平均值的多重比較，以P＜0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。采用曲線(xiàn)估計(jì)程序?qū)︼暭ZVal /Lys值( x) 與生長(zhǎng)性能指標(biāo)( y) 進(jìn)行線(xiàn)性和二次模型回歸分析，P＜0.05 表示差異顯著。

2.1 低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

    由表3可知，低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val能顯著提高1～42日齡肉雞末體重(FBW)和ADG(P＜0.05)，對(duì)肉雞ADFI無(wú)顯著影響(P＞0.05);與Ⅰ組相比，Ⅳ組F/G顯著降低(P＜0.05);隨著飼糧Val水平的提高，肉雞LBW、ADG和F/G均呈二次曲線(xiàn)變化趨勢(shì)(P＜0.05)。當(dāng)Val/Lys值分別為80.07%和81.03%時(shí)，1～42日齡肉雞分別能獲得最大ADG和最優(yōu)的F/G。

3.1 低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

     低蛋白質(zhì)飼糧是依據(jù)動(dòng)物的理想氨基酸模式配制的，即飼糧中蛋氨酸、Lys等必需氨基酸滿(mǎn)足動(dòng)物需要量才能達(dá)到不因降低飼糧粗蛋白質(zhì)水平而影響生長(zhǎng)性能的效果。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val具有顯著提高肉雞ADG及降低F/G的效果，該試驗(yàn)結(jié)果與Tavernari等、Nascimento等、Corzo等和Berres等研究報(bào)道相似。Tavernari等研究表明，當(dāng)前期(8～21日齡)和后期(30～42日齡)飼糧粗蛋白質(zhì)水平分別為20%和18%時(shí)，飼糧補(bǔ)充Val對(duì)前期、后期肉雞的ADG和F/G均有顯著改善效果。Nascimento等研究報(bào)道，當(dāng)后期(21～42日齡)飼糧粗蛋白質(zhì)水平降到16.5%時(shí)，通過(guò)補(bǔ)充Val，其ADG和F/G能達(dá)到與粗蛋白質(zhì)水平為18.5%的對(duì)照組一樣效果。本試驗(yàn)表明，低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val能提高肉雞ADFI，可能與Val能夠調(diào)節(jié)下丘腦食欲的神經(jīng)元阿黑皮素原及胃底腺黏膜膽囊收縮素的mＲNA表達(dá)量有關(guān)。低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val改善肉雞生長(zhǎng)性能的原因可能是飼糧中蛋氨酸、Lys、蘇氨酸和色氨酸等必需氨基酸滿(mǎn)足肉雞需要量時(shí)Val成為限制性氨基酸，補(bǔ)充Val起到了平衡飼糧氨基酸的作用。此外，Val與異亮氨酸、亮氨酸同屬肉雞必需支鏈氨基酸，飼糧中亮氨酸的含量往往高于肉雞需要量，飼糧補(bǔ)充Val能夠起到抵消支鏈氨基酸之間的拮抗作用，從而提高飼糧氨基酸的利用率。

     Mack等研究報(bào)道，以20～40日齡羅斯208肉雞為研究對(duì)象時(shí)，飼糧Val/Lys推薦值為80%。Corzo等對(duì)羅斯308肉雞生長(zhǎng)前期(1～14日齡)、中期(15～28日齡)和后期(29～42日齡)的Val需要量進(jìn)行了研究，其Val/Lys推薦值分別為77%、78%和75%。Tavernari等研究表明，科寶(Cobb)500肉雞生長(zhǎng)前期和后期的可消化Val/Lys推薦值分別為77%和76%。本研究結(jié)果表明，當(dāng)飼糧Val/Lys值分別為80.07%和81.03%時(shí)，AA肉雞獲得最大ADG和最小F/G，該Val/Lys值與Mack等推薦值較接近。造成這種差異的原因可能是肉雞品種、生長(zhǎng)階段和飼糧營(yíng)養(yǎng)水平的不同。

3.2 低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val對(duì)肉雞屠宰性能的影響

     屠宰性能是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在不同組織或同一組織不同部位中沉積量差異的一項(xiàng)指標(biāo)，而胸肌率、腿肌率是肉雞產(chǎn)肉量的重要指標(biāo)。目前已有的關(guān)于飼糧補(bǔ)充Val對(duì)肉雞屠宰性能影響的研究結(jié)果并不一致。Tavernari等和Duarte等研究報(bào)道，飼糧Val/Lys水平對(duì)Cobb500肉雞屠宰率、胸肌率和腿肌率無(wú)顯著影響。Corzo等研究結(jié)果表明，當(dāng)飼糧Val水平由0.64%遞增至0.99%時(shí)，羅斯308肉雞屠宰率、胸肌率和腿肌率呈二次曲線(xiàn)增加。本研究中，盡管Val對(duì)肉雞FBW和ADG有顯著影響，但對(duì)肉雞屠宰性能無(wú)顯著影響。

3.3 低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val對(duì)肉雞血清生化及抗氧化指標(biāo)的影響

     血清TP和ALB有維持血漿滲透壓、組織蛋白動(dòng)態(tài)平衡、血液pH穩(wěn)定以及運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等作用，GLB與機(jī)體免疫力有密切聯(lián)系，血清中ALB/GLB可反映機(jī)體營(yíng)養(yǎng)和免疫狀況。陳熠研究報(bào)道，飼糧中補(bǔ)充Val能顯著提高哺乳母豬第10天及第18天血清ALB含量。此外Azzam等試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼糧中Val達(dá)到0.8%時(shí)能顯著提高蛋雞血清中ALB和TP含量。在本試驗(yàn)中，Ⅱ～Ⅴ組肉雞血清中TP、ALB和GLB含量與Ⅰ組相比僅體現(xiàn)在數(shù)值上的提高但不顯著。家禽血清中的UA主要來(lái)源于家禽體內(nèi)蛋白質(zhì)、氨基酸和核酸的分解代謝，所以血清UA含量能反映家禽的蛋白質(zhì)利用情況。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，Ⅱ～Ⅴ組肉雞血清UA含量與Ⅰ組相比均有下降，且呈先下降后上升的趨勢(shì)，當(dāng)Val/Lys值為83%時(shí)，血清UA含量最低，表明適量補(bǔ)充Val提高肉雞對(duì)飼糧粗蛋白質(zhì)的利用效率，而過(guò)量補(bǔ)充Val反而降低飼糧粗蛋白質(zhì)的利用。

     本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)飼糧Val/Lys值為73%、83%和88%時(shí)，能顯著提高血清中Glu含量。代臘等研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼糧中Val水平為0.8%時(shí)血清中Glu含量最高，且顯著高于其他組。王勇研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)哺乳母豬連續(xù)21d飼喂Val/Lys值為120%的飼糧時(shí)可使血清中Glu含量提高。Val能提高血清Glu含量的作用可能與其代謝途徑有關(guān)，飼糧中的Val被動(dòng)物消化吸收后，雖然可以在肝臟直接進(jìn)行分解代謝，但其主要是在肌肉組織中氧化降解。Val在轉(zhuǎn)氨基酶和α支鏈酮酸脫羧酶等作用下形成谷氨酰胺和琥珀酰輔酶A等產(chǎn)物，進(jìn)入丙酮酸－葡萄糖的糖異生途徑，從而維持動(dòng)物機(jī)體血糖平衡。

     CAT和T-SOD是機(jī)體主要的抗氧化酶，能清除機(jī)體內(nèi)自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，機(jī)體內(nèi)這2種酶活性的升高能夠有效抑制動(dòng)物組織細(xì)胞脂質(zhì)的過(guò)氧化和機(jī)體自由基的生成，是機(jī)體自我防御和免疫系統(tǒng)的重要酶的組成成分;脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)最終會(huì)形成MDA，通過(guò)測(cè)定其含量可以有效判斷機(jī)體內(nèi)組織細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化程度。本試驗(yàn)表明，低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val對(duì)血清中的CAT和T-SOD活性無(wú)顯著影響，但能顯著降低MDA含量。代臘等研究表明，隨著飼糧Val水平的升高，蛋雞血清中MDA含量先升高后顯著下降，在飼糧Val為0.8%時(shí)達(dá)到最大值;而血清中T-SOD活性先顯著降低后升高，在飼糧Val為0.7%時(shí)達(dá)到最小。王勇研究報(bào)道，飼糧補(bǔ)充Val能提高了母豬哺乳期間血清和母乳中總抗氧化能力和T-SOD活性，降低血清和母乳中MDA含量。這說(shuō)明飼糧補(bǔ)充Val能夠提高畜禽的抗氧化能力，其調(diào)控機(jī)理尚需進(jìn)一步的研究。

3.4 低蛋白質(zhì)飼糧補(bǔ)充Val對(duì)肉雞血清游離氨基酸含量的影響

     血清中游離氨基酸主要來(lái)源于組織蛋白質(zhì)的降解及腸道對(duì)飼糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，其含量在一定程度上可以反映出動(dòng)物體內(nèi)氨基酸的代謝狀況;當(dāng)飼糧氨基酸水平不能滿(mǎn)足動(dòng)物需要時(shí)，血清游離氨基酸含量偏低。Ｒen等研究報(bào)道，飼糧中補(bǔ)充某種氨基酸時(shí)，血清中該氨基酸水平也相應(yīng)升高。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧Val水平升高，血清中Val含量呈先升高后平穩(wěn)的趨勢(shì)，Ⅱ～Ⅴ組與Ⅰ組相比均有所提高;且當(dāng)飼糧Val/Lys值為78%時(shí)，血清中Lys、色氨酸和苯丙氨酸等必需氨基酸含量均比其他組高，其原因可能為此時(shí)飼糧氨基酸更加趨于平衡，肉雞對(duì)飼糧中氨基酸的利用率提高，從而血清中氨基酸含量提高。研究表明，在氨基酸代謝過(guò)程中支鏈氨基酸因共用支鏈氨酸轉(zhuǎn)氨酶和脫氫酶使得3種氨基酸之間存在拮抗作用，在本試驗(yàn)中也得以證明，當(dāng)Val/Lys值較高(83%和88%)時(shí)，血清中的異亮氨酸和亮氨酸含量均低于Ⅰ組。